一、イオン交換クロマトグラフィー

イオン交換クロマトグラフィーは化合物の正味電荷に基づいて分離する。負電荷または正電荷を有する官能基は固相担体マトリックスに共有結合し、それぞれ陽イオン交換剤と陰イオン交換剤となる。電荷を帯びた分子が反対の電荷を帯びた交換剤に加わると吸着され、同時に同じ電荷を帯びたイオンと中性分子がクロマトグラフィーカラムの外水体積に溶出される。帯電分子の結合は可逆的であり、通常は塩またはPH勾配で吸着した分子を溶出することができる。

イオン交換クロマトグラフィーは、生体分子の分離および精製、無機イオンの分離、試薬および水の脱イオン化、塩変換、および金属イオンの除去、臭化エチルインゴットおよびSDSの除去を含む様々な用途が可能である。

両性化合物の分離戦略。分子がPHが等電点よりも高いときに安定であれば、アニオン交換樹脂を用いることができる。分子がPHがその等電点未満で安定であれば、カチオン交換樹脂を用いる。

米国GE（旧アンマーシア）クロマトグラフィー充填剤（常用モデル）

二、親和クロマトグラフィー

アフィニティークロマトグラフィー中、リガンドは分離される分子と特定の親和性を持ち、固体の上に共有結合する。試料混合液をこれらのマトリックスから形成されたクロマトグラフィーカラム担体に添加すると、標的分子（例えばタンパク質、ポリペプチド、DNA断片など）がマトリックスに固定された配位子と結合し、混合液中の親和性のないグループ分析が析出する。PH値、濃塩度を変更し、有機溶媒を使用したり、リガンドと競合的に結合している分子を加えることで、標的分子を溶出することができます。

米国GE（旧アンマーシア）クロマトグラフィー充填剤（常用モデル）

親和クロマトグラフィー充填剤：

金属キレートフィラー：

17-0920-07フィラー名：IMACSepharoseHighPerformance

17-0921-09フィラー名：IMACSepharose6FF

三、分子量排除クロマトグラフィー（別名モレキュラーシーブクロマトグラフィー、ゲルろ過クロマトグラフィー）

分子量排除クロマトグラフィー（SEC）はゲルろ過クロマトグラフィーとも呼ばれ、分子量の大きさに応じて分子を分離する。ゲルマトリックスは、特定の大きさの細孔の球形ビーズからなる異なる分子量の分子が細孔から排出され、分離される。小分子が孔内に入ると、それらはクロマトグラフィーカラムを通過するのを遅らせるが、高分子は孔を避け、クロマトグラフィーカラムの外水体積に溶出する。したがって、サンプルは分子量の大きさに基づいて分離され、分子量の逓減順序に従って溶出される。

クロマトグラフィーの目的と必要な解像度に基づいて動作条件と媒体を選択します。分子量排除クロマトグラフィーにおける通常の方法は、基分離であり、以下を含む：

脱塩−標的分子は溶出され、小分子はゲル孔内に保持される。理想的な分離を得るためには、マトリックスの分子量排除限界は目標分子よりも小さくなければならない。

分級分離−一定分子量範囲の分子をゲルマトリックス内で分離する。この方法を使用する場合、標的分子はゲルの分級分離範囲内でなければならない。

分子量排除クロマトグラフィーの通常の使用には、タンパク質分級分離及び分子量決定、核酸分離、プラスミド精製及び多糖類分級分離が含まれる。

クロマトグラフィー解像度は粒子サイズ、開口サイズ、流速、クロマトグラフィーカラムサイズ、サンプル体積に依存する。通常、低流速（2〜10 cm／hr）、細長いカラム、小粒子ゲル、小試料体積（全床体積の1〜5%）、2倍の分子量差、および同じ溶液粘度で、最高分解能を得ることができる。脱塩に使用する場合、様式の体積は総床の体積の30-40%に達することができ、短太柱を使用することができる。

米国GE（旧アンマーシア）クロマトグラフィー充填剤（常用モデル）

ゲルろ過充填剤：

四、疎水作用クロマトグラフィー

疎水性クロマトグラフィー（HIC）は化合物の疎水性に基づいて分離する、疎水性及び親水性基を有する試料分子を高塩緩衝液にHICクロマトグラフィーカラムに添加し、緩衝液中の塩は試料の溶解度を低下させた。全溶解度の低下により、露出した疎水性基は媒体に吸着される。化合物の疎水性が強いほど、結合力を高めるための塩を加える必要が少なくなる。通常は疎水性の増分順序に従って、クロマトグラフィーカラム内のサンプルを減塩勾配で溶出し、溶出に穏やかな有機調整物または洗剤を加えて完成することもできる。

米国GE（旧アンマーシア）クロマトグラフィー充填剤（常用モデル）

疎水クロマトグラフィー充填剤：

五、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー

ヒドロキシアパタイト（Ca 5（PO 4）3 OH）2はリン酸カルシウムの一種であり、他のクロマトグラフィー技術と電気泳動技術では区別できないタンパク質の分離に独特の選択性と分解能を有する。ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーは、最初に捕捉されてから最も完全なステップに適応する。次の分離と精製に適用します。

・異なる種類のモノクローナルとポリクローナル抗体・超らせんと線形DNAの区別

・軽鎖組成の異なる抗体・二本鎖DNAと単鎖DNAの区別

・抗体断片・ウイルス・ホモ酵素