3 Dナノイメージングと単分子追跡アップグレード

過去数年間、光学顕微鏡（STED、PALM、STORM）を用いてナノ解像度を有する細胞特徴画像を得るために、いくつかの方法が考案されてきた。これらの方法は強力であるが、画像中の疎ナノ構造を検出する際の効率はかなり低い。さらに、ナノスケール3 D構造においてサブ秒時間スケールで発生する化学反応の動力学を検出するには不十分であり、これらの構造は絶えず移動し、形状を変化させている。

NanoImaging超分解能法を用いて、レーザビームは格子画像のように所定のパターンに沿ってサンプルを走査しない。対照的に、レーザ走査イメージングはフィードバックアルゴリズムに基づいており、走査中にイメージングする物体の形状に基づいてレーザビームが従う経路を連続的に調整し、決定する。このアルゴリズムはレーザースポットを物体の表面から固定距離に移動する、レーザスポットの位置と表面からの距離は既知のパラメータであるため、物体の形状を再構築するために使用されます。3 D細胞構造は、数秒間で20〜40 nmまで2 nmの精度で分解することができる。

SMTナノイメージングを使用するための操作のシーケンスは直接です：まず、興味のある領域の共焦点画像を取得します。その後、画像化するオブジェクトはユーザーによって識別されます。SMTナノイメージングはスイッチを通じて活性化され,レーザービームはオブジェクトの中心から100-200nmの距離に位置します.レーザースポットが画像を撮る表面に近づくと、レーレーザースポットの荧光量が増加します。しかし、しかししかししかししかししかし、しかししかししかししかししかししかししかし、しかししかししかし、しかししかししかししかし、しかししかししかし しかししかししかし しかし、しかししかししかし しかし、しかししかししかししかし しかししかししかししかし、しかししかししかししかし、しかししかししかししかししかししかししかし距離の効果を浓度による効果から分離するために,スポットの位置は表面に垂直に振動させられます.つまり、振動中につつつつつまり、つつつつつまり、つつつつまり、つつつつまり、つつつつまり、つつつつつまりつつつつつまり、つ

図1。Modulation Tracking Technique の概要ビームスポットは物体の周りの円形轨道で移動し、物体の表面からの距離は定期的に定期的な周波数で変化する。通常、各轨道の振動数は、物体の大きさに応じて8から32の間である。これらの半径の小さな振動は,轨道の調節関数を計算するために使用され,それからスポットの表面からの距離を決定します.
調節関数は,表面の局所変変換部分と平均部分の間の比率として定義されます.実際には、調節はPSFの空間派生と強度の比率です。調節関数は,表面からの距離の関数として準線形的に増加し,この特徴は,轨道沿いの表面からのレーザースポットの距離を決定するために使用することができます.このように,オブジェクトの横向形状を計算し,再構築します.

以下は、ナノイメージングユニットとFV1000共焦点以下のFV1000共焦点显微鏡への接続の図です。スイッチボックスにより,ユーザーは標準的な操作モードでFV1000を操作するか,ナノイメージングシステムを有効にすることができます.ナノイメージング操作では、FV1000のガルボミラーはISSが提供する電子機器を通じて制御されます。信号はFV1000の内部検出器によって収集され、ISSの光子カウントデータ収集ユニットに転送されます。分子はFV1000のガルボ制御鏡を使用してXY平面で追跡され、z軸でピエゾ制御段階で追跡されます。儀器制御,データ収集,表示は別のコンピュータで行われます.

右のセクションには,儀器の部品 (PC,制御電子,スキャナー,レーザーランチャー) が含まれています.図表の左側には、アップグレードパッケージでISSが提供するコンポーネントが含まれています。

	モジュレーション追跡法によるナノメートルスケールイメージング Lanzano, L.、Digman, M.A.、Fwu, P.、Giral, H.、Levi, M.、Gratton, E. J Biophotonics、2011、4（6）、415-24。
	ナノスケール精密イメージングによる距離測定 Rapid Beam Oscillation Method Lanzano, L.、Gratton, E. Microsc Res Tech, 2012, 75(9), 1253-64。
	3次元単粒子追跡におけるリアルタイム多パラメータ分光学と局所化 Hellriegel, C.、Gratton, E. J R Soc Interface, 2009, 6, Suppl 1:S3-14。
	3次元単一粒子追跡を通じてリアルタイムナノ显微鏡 Katayama, Y.、Burkacky, O.、Meyer, M.、Bräuchle, C.、Gratton, E.、Lamb, D.C. Chemphyschem, 2009, 10(14), 2458-64。
	2光子鏡での刺激光束の円形スキャンによる距離測定 Kis-Petikova, K.、Gratton, E. Microsc Res Tech、2004年、63（1）、34-49。